In the biotrophic phase the fungus invades young host tissues provoking a local response in the host tissues characterized by considerable swelling (Orchard et al., 1994). The biotype C has a hemibiotrophic life style. There is evidence that it has developed concomitantly with its host in the Amazon Basin (Pound, 1943). perniciosa is one of the most important cacao pathogens. Witches broom disease in cacao is caused by the basidiomycete fungus Moniliophthora perniciosa (Stahel), ( Agaricales, Tricholomataceae), formerly Crinipellis perniciosa (Aime and Phillips-Mora, 2005). Juntos os procedimentos reportados aqui resultaram em processos mais eficientes de produção de protoplastos e transformação, onde o tempo necessário para o aparecimento dos transformantes e o número de inserções múltiplas foi reduzido. No entanto, a freqüência de transformantes multi-cópias aumentou significativamente. O uso de plasmídeos pré-linearizados não aumentou a eficiência da transformação quando comparado à eficiência obtida com plasmídeos circulares. A adição de BamHI ou NotI aumentou o número de transformantes 3-10 vezes e 3 vezes, respectivamente, em relação ao controle sem a adição da enzima. A influência da forma do vetor (linear ou circular), o padrão de integração do plasmídeo nos sítios genômicos e a influência do promotor usado para expressar o gene marcador foram também analisados. Key words: Moniliophthora perniciosa, transformation, restriction enzymeĪ presença de enzima de restrição na mistura de transformação aumentou a eficiência da transformação em Moniliophthora perniciosa. In addition, the time necessary for the detection of the first transformants and the number of insertions were reduced. The transformation procedure here reported resulted in better production of protoplasts and transformation efficiency. However, the frequency of multi-copy transformants increased significantly. The use of pre-linearized plasmid did not increase the transformation efficiency in comparison with the circular plasmid. The addition of BamHI or NotI increased the number of transformants by 3-10-fold and 3-fold, respectively, over the control without added enzyme. The influence of the vector shape (linear or circular), the patterns of plasmid integration in genomic sites and the influence of the promoter used to express the gene marker were also analyzed. The presence of restriction enzymes in the transformation mixture improved the efficiency of transformation in Moniliophthora perniciosa. Juliana Oliveira Lima Viviane Aline Oliveira Silva Elza Fernandes de Araújoĭepartmento de Microbiologia BIOAGRO Universidade Federal de Viçosa Campus Universitário Viçosa - MG - Brasil Restriction enzyme improves the efficiency of genetic transformations in Moniliophthora perniciosa, the causal agent of witches broom disease in Theobroma cacaoįrancis Julio Fagundes Lopes Marisa Vieira de Queiroz * * Note: For methylation sensitivity, refer to product specifications.AGRICULTURE, AGRIBUSINESS AND BIOTECHNOLOGY
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